Awọn oniwadi Dutch darapọ CRISPR ati bioluminescence ninu idanwo idanwo funàkóràn arun

Awọn amuaradagba alẹ tuntun ti o ni idagbasoke le yara yara ati irọrun ayẹwo ti awọn arun ọlọjẹ, ni ibamu si awọn oniwadi ni Fiorino.
Iwadi wọn, ti a tẹjade ni Ọjọbọ ni Awọn atẹjade ACS, ṣapejuwe ifura kan, ọna-igbesẹ kan fun ṣiṣe itupalẹ iyara awọn acids nucleic viral ati irisi wọn nipa lilo awọn ọlọjẹ bulu didan tabi awọn ọlọjẹ alawọ ewe.
Idanimọ ti pathogens nipa wiwa awọn ika ọwọ acid nucleic wọn jẹ ilana pataki ni awọn iwadii ile-iwosan, iwadii biomedical, ati ounjẹ ati abojuto aabo ayika.Awọn idanwo pipo polymerase pipo ti a lo lọpọlọpọ (PCR) jẹ ifarakanra gaan, ṣugbọn nilo igbaradi ayẹwo fafa tabi itumọ ti awọn abajade, ṣiṣe wọn jẹ alaiṣe fun diẹ ninu awọn eto ilera tabi awọn eto to lopin orisun.
Ẹgbẹ yii lati Fiorino jẹ abajade ti ifowosowopo laarin awọn onimo ijinlẹ sayensi lati awọn ile-ẹkọ giga ati awọn ile-iwosan lati ṣe idagbasoke iyara, gbigbe ati irọrun lati lo ọna iwadii nucleic acid ti o le lo ni ọpọlọpọ awọn eto.
Wọ́n ní ìmísí láti ọ̀dọ̀ àwọn ìmọ́lẹ̀ iná tí ń jóná, àwọn ìràwọ̀ tí ń tàn yòò, àti àwọn ìràwọ̀ kékeré ti phytoplankton inú omi, gbogbo rẹ̀ ní agbára nípasẹ̀ ìṣẹ̀lẹ̀ kan tí a ń pè ní bioluminescence.Ipa didan-ni-dudu yii jẹ idi nipasẹ iṣesi kemikali ti o kan amuaradagba luciferase.Awọn onimo ijinlẹ sayensi ti ṣafikun awọn ọlọjẹ luciferase sinu awọn sensosi ti o tan ina lati dẹrọ akiyesi nigbati wọn rii ibi-afẹde kan.Lakoko ti eyi jẹ ki awọn sensọ wọnyi jẹ apẹrẹ fun wiwa aaye-ti-itọju, lọwọlọwọ wọn ko ni ifamọra giga ti o nilo fun awọn idanwo iwadii ile-iwosan.Lakoko ti ọna ṣiṣatunṣe jiini CRISPR le pese agbara yii, o nilo ọpọlọpọ awọn igbesẹ ati afikun ohun elo amọja lati ṣawari ifihan agbara ti ko lagbara ti o le wa ni eka, awọn apẹẹrẹ alariwo.
Awọn oniwadi ti rii ọna lati darapo amuaradagba ti o ni ibatan CRISPR pẹlu ifihan agbara bioluminescent ti o le rii pẹlu kamẹra oni-nọmba ti o rọrun.Lati rii daju pe RNA ti o to tabi ayẹwo DNA wa fun itupalẹ, awọn oniwadi ṣe atunṣe ampilifaya polymerase (RPA), ilana ti o rọrun ti o nṣiṣẹ ni iwọn otutu igbagbogbo ti ni ayika 100 ° F.Wọn ṣe agbekalẹ ipilẹ tuntun kan ti a pe ni Luminescent Nucleic Acid Sensor (LUNAS), ninu eyiti awọn ọlọjẹ CRISPR/Cas9 meji wa ni pato fun awọn ipin contiguous ti o yatọ ti genome gbogun, ọkọọkan pẹlu ajẹku luciferase alailẹgbẹ ti a so mọ wọn loke.
Nigbati genome gbogun ti pato ti awọn oniwadi n ṣe ayẹwo wa, awọn ọlọjẹ CRISPR/Cas9 meji sopọ mọ ọkọọkan acid nucleic afojusun;wọn wa ni isunmọtosi, gbigba amuaradagba luciferase ti ko tọ lati dagba ati ki o tan ina bulu ni iwaju sobusitireti kemikali kan..Lati ṣe akọọlẹ fun sobusitireti ti o jẹ ninu ilana yii, awọn oniwadi lo iṣedari iṣakoso ti o tan ina alawọ ewe.tube ti o yipada awọ lati alawọ ewe si buluu tọkasi abajade rere kan.
Awọn oniwadi ṣe idanwo pẹpẹ wọn nipa ṣiṣe idagbasoke idanwo RPA-LUNAS, eyiti o ṣe awariSARS-CoV-2 RNAlaisi ipinya RNA ti o nira, ati ṣe afihan iṣẹ ṣiṣe iwadii rẹ lori awọn ayẹwo swab nasopharyngeal latiCOVID 19alaisan.RPA-LUNAS ṣe awari SARS-CoV-2 ni aṣeyọri laarin awọn iṣẹju 20 ni awọn ayẹwo pẹlu ẹru gbogun ti RNA kan bi kekere bi awọn adakọ 200/μL.
Awọn oniwadi gbagbọ pe idanwo wọn le ni irọrun ati imunadoko ri ọpọlọpọ awọn ọlọjẹ miiran.“RPA-LUNAS jẹ ohun ti o wuyi fun idanwo arun ajakalẹ-arun,” wọn kọwe.